有没有被PCR、RT-PCR、qPCR、Real-time PCR、real-time RT-PCR这一堆缩写弄的晕头转向的经历?刚开始接触这些PCR缩写时,真的傻傻分不清。
什么是 RT-PCR?
RT-PCR就是反转录PCR,是PCR(聚合酶链式反应)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
那什么是 qPCR、Real-time-PCR?
其实 Real-time-PCR和 qPCR是一码事,都是实时定量PCR,指的是PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。
那Real-time PCR、RT-PCR 呢?
Real-time PCR ≠ RT-PCR
虽然Real-time PCR(实时荧光定量PCR)和 RT-PCR(反转录PCR)看起来都可以缩写为RT-PCR,但是,国际上的约定俗成的是:RT-PCR特指反转录PCR,而Real-time PCR一般缩写为 qPCR(实时荧光定量PCR)。
两者英文全称是完全不同的,Real-time PCR的全称为quantitative real-time PCR,RT-PCR的全称为reverse transcription PCR。
什么是 real-time RT-PCR或RT-qPCR?
real time RT-PCR指的是 qPCR+RT-PCR的组合,是说将RNA逆转录为cDNA后再作为模板进行实时荧光PCR分析,因为RT-PCR是可以定性的,但不能进行定量检测的。
所以不难理解 real-time RT-PCR(RT-qPCR) 就是结合了荧光定量技术的反转录PCR:先从 RNA 反转录得到 cDNA(RT),然后再用 Real-time PCR进行定量分析(qPCR)。
所以,实时荧光定量PCR,它不仅可以用cDNA作为模板,也可以用基因组DNA等作为模板。
总结一下
RT-PCR=反转录PCR
Real-time PCR=qPCR 实时荧光定量PCR
Real-time RT-PCR=RT+qPCR
明白了吗?