pcr技术发展历史及pcr反应基本原理和反应过程

　

pcr技术发展历史

1、1971年：Korana最早提出核酸体外扩增的设想。
2、1985年：Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应,使用的DNA聚合酶是Klenow片段,因为这个发现, Mullis获得了1993年诺贝尔化学奖。
3、1988年初：Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR。
4、1988年：Saiki发现Taq DNA聚合酶,从此PCR技术得以广泛应用。
5、1990年：Haase首创原位PCR反应。
6、1992年：Higuchi提出aPCR技术
7、2006年：第三代PCR


pcr之父 Kary Mullis

pcr反应基本原理

1、变性
2、退火
3、延伸
4、第二次循环
3、第三次循环

pcr反应过程

变性——将被复制的DNA片段在高于其Tm的条件下（94~95℃）加热，使DNA双螺旋结构的氢键断裂二解螺旋，形成两条单链分子作为扩增反应的模板，以便与引物结合。
退火——将反应体系的温度降至寡核苷酸（引物）的熔点温度以下（40~70℃），以便使引物能与模板DNA序列互补结合，形成杂交链。
延伸——将反应体系的温度升至72℃左右，此时反应体系按照模板链的序列以碱基互补配对原则以此把dNTP加至引物的3’端，在Taq DNA聚合酶的存在下，杂交链不断延伸，直至形成新的DNA双链。