蛋白质分离纯化遵循的原则

　

蛋白质分离纯化总体原则

1）纯化前对样品的来源，目的蛋白的理化性质及生物活性要做充分了解。
2）纯化前明确纯化所要达到的目的及目标。
3）根据所要达到的目的在回收率，纯度，成本等之间合理取舍次要指标，把主要指标放在第一位。如科学研究，鉴定蛋白结构，纯度就是第一指标，回收率等次之。

蛋白质分离纯化过程

    纯化每一步都充分利用目标蛋白和杂质成分理化性质差异。如大肠杆菌菌体蛋白大多是一些低分子量蛋白（<50000Da），且酸性蛋白较多。

蛋白纯化方法的选择

        根据蛋白理化特性选择分离材料和纯化方法，避免利用相同技术进行多次纯化；对纯化方法，及各种方法的适用性，各种方法的差异性做充分的了解。如排阻层析不适合用于分子量相差不到10%的样品的分离。

蛋白质分离纯化不同阶段突出重点

1）纯化早期尽量减少样品处理体积，方便后续纯化；如目的蛋白在发酵液中，前期用盐析，膜过滤等方式去除大量的水分和小分子杂质。
2）纯化后期由于样品处理量和杂质量都已减少，可使用价格昂贵的高效分离材料进行精制，利于降低分离纯化成本，提高产品收率和纯度，实现工艺性价比最优化。

层析方法	亲和层析	凝胶过滤层析	离子交换层析	疏水层析
分离机制	特异性亲和	大小	电荷	疏水性
选择性	非常高	中等	高	高→中等
载量	高	低	高	高
纯化速度	中等	中等→低	高	高
生物相容性	好	非常好	好	中等→好
目标蛋白的得率	高	高	高	中等→高
捕获浓缩阶段	+++	+	+++	+++
中间纯化阶段	+++	+	+++	+++
精致纯化阶段	++	+++	+++	+

相关专题：

重组蛋白
蛋白提取纯化