抗体纯化基本原理：
protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。
Protein A和proteinG 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上，当抗血清从中流过时，特异性的IgG就与配基结合，其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同，我们需要具体情况具体对待，分别选择protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G组合。一般推荐小鼠单抗IgG2a,IgG2b,IgG3，兔，人，猪的多克隆抗体用protein A纯化，而小鼠单抗IgG1, 大鼠单抗，小鼠，大鼠，山羊的多克隆抗体则选择用protein G纯化。
具体实验步骤如下：
1、称取经CNBr活化了的sepharose 4B 0.5g, 溶于2mM的HCL溶液中，4摄氏度过夜，使其充分溶胀。
2、将溶胀好了的sepharose 4B预装于层析柱中，用10倍体积的2mM HCL溶液洗涤三次后用0.1 M NaHCO3 溶液对柱子进行平衡
3、将5mg protein A/G 溶于0.1 M NaHCO3溶液中，加入步骤b中已平衡好的柱子，置于摇床上轻轻混合2到8摄氏度过夜或者室温2到4小时
4、用0.1 M NaHCO3 溶液洗涤c中已经结合了蛋白的柱子三次。事先留取已经结合过了的上清，用紫外可见分光光度计测定结合后上清中蛋白的浓度，以确定结合率。
5、用0.01M tris base 平衡柱子三次，加入0.5% BSA封闭sepharose 4B上未结合的位点，置于摇床上在室温反应2到4小时。
6、用0.01M tris base 平衡柱子3次。
7、加入要纯化的经预处理了的抗血清5ml，置于摇床上在室温反应2到4小时.
8、用0.01M tris base 洗涤柱子三次以上，洗掉未结合的杂蛋白
9、用9ml 0.1 M PH 2.5甘氨酸洗脱结合在柱子上的抗体
10、将1ml 1M NaHCO3溶液加入EP管中中和步骤i中洗脱的抗体
11、将步骤j中的抗体溶液装入透析袋经PEG20000或者蔗糖浓缩至2ml后于0.01MPBS中透析4次以上，每次换液间隔时间为1小时以上。
12、将透析好了的抗体用紫外可见分光光度计测定其在波长280nm处的吸光值，用吸光值除以1.35即为所测抗体的浓度
13、将所纯化的抗体加入30%-50%的甘油置于-20摄氏度或者-80摄氏度即可长期保存。
