PCR实验室是分子诊断的基础,也是进行PCR实验的必备场所。近些年,分子诊断行业快速发展,使得很多IVD从业者对PCR的认识又进入到了一个新的阶段,但是基于实验室的基本知识仍然是非常重要的一环。
PCR实验室的设计原则
原则上应当设置4个区域:试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。
根据采用仪器的功能,区域可适当合并。
采用实时荧光
PCR仪,扩增区、扩增产物分析区可合并;
采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪,则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。
各区功能必备物品明细:
1、试剂储存和准备区(1区)
功能:
贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
必备物品:
2~8℃和-20℃以下冰箱。
混匀器。
微量加样器(覆盖0.2-1000µl)
2、标本制备区(2区)
功能:
核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作,应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
必备物品:
2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。
高速离心机。
混匀器。
水浴箱或加热模块。
微量加样器(覆盖0.2-1000µl)。
生物安全柜。
3、扩增区(3区)
功能:
cDNA合成、DNA扩增及检测。
必备物品:
核酸扩增仪(或荧光定量PCR仪)
4、扩增产物分析区(4区)
功能:
扩增片段的进一步分析测定,如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
必备物品:
杂交仪、电泳仪、测序仪等
微量加样器(覆盖0.2-1000µl)
通用物品(4个区都有可能需要)
可移动紫外灯(近工作台面)。
消耗品:一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头。
专用工作服和工作鞋(套)。
专用办公用品。
样本管架(2区)
防爆夹(2区)
PCR管架(2区、传递窗)
其他物品