重组蛋白A预装柱 （rec-Protein A Column）

　

重组蛋白A预装柱规格

产品编号及规格：GD A001-1mL;  GD A001-2mL； GD A001-5mL；GD A001-50mL；GD A001-150mL；
生产批次：见产品标签
有效期：4℃长期存放，有效期三年

重组蛋白A预装柱简介

产品形式

本产品通过现代基因工程重组技术，将蛋白A基因在大肠杆菌中高效表达，可溶性表达产物经亲和层析纯化后共价偶联于填料上。上述产品按批次质控后、依照国际上保存方式，保存于20%乙醇中待用。

产品简介

天然蛋白A或蛋白G、蛋白A/G 可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合。使用的重组rec-Protein A 或rec-Protein G、 rec-Protein A/G是通过基因工程-重组蛋白的方法表达获得。由于重组表达的rec-Protein A或rec-Protein G、rec-Protein A/G去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点，特异性更好。
本产品采用“高配基、高浓度、小体积”的创新偶联技术，将填料中有限的羟基(-OH)结合位点充分活化，使得单位体积中结合更多蛋白A、蛋白G、蛋白A/G，产品最终纯化效率较普通偶联有30%的提高。蛋白A或蛋白G、蛋白A/G偶联填料可直接用于血清、腹水中IgG抗体纯化，或用于含Fc片段的重组蛋白的纯化。

产品技术指标

rec-Protein A/Sepharose 比值：
28~35mg rec-Protein A/ml Sepharose
结合能力：
50-65mg人IgG / ml填料（上样1次）
42-60mg兔IgG / ml填料（上样1次）
rec-Protein A分子量：
34.85 KDa
每分子rec-Protein A可结合IgG位点数：
4个
每分子rec-Protein A可结合白蛋白位点数：
无
线性流速：
100-150 cm/h
耐压指数：
0.008 MPa

产品保存

产品储存于2-8℃

rec-Protein A预装柱纯化IgG抗体步骤

以下实验方法适用于从血清或腹水中纯化IgG抗体，不同来源的IgG与rec-Protein A的结合能力不同，具体情况请参考表1。
1. 将血清或腹水样品（推荐上样量2 mL样品/mL柱）装入截留分子量3.5 KDa透析带中，于4 ℃冰箱中对1× PBS（pH 7.4）透析过夜；
2. 将rec-Protein A-Sepharose装柱固定好，用10倍柱体积1× PBS（pH 7.4）平衡层析柱，建议流速为1 mL/min；
3. 将透析好的样品从层析柱上端加入，建议流速为1 mL/min，为了获得更好的抗体结合效果可将流穿液再上样，重复2遍（或将样品1次性加入层析柱后置于摇床上，轻轻摇动，结合30 min）；
4. 样品结合后，用20倍柱体积1× PBS(pH 7.4)洗涤层析柱，建议流速为1 mL/min，勿让层析柱滴干；
5. 洗脱IgG，向层析柱上端加入洗脱液（100 mM甘氨酸，pH 2.7），用预先加有100 μL中和缓冲液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱体积，进行10 % SDS-PAGE电泳，确定IgG样品所在管，回收样品。
6. 加入5倍柱体积再生缓冲液（100 mM甘氨酸，pH 2.0），再加入10倍柱体积ddH2O清洗层析柱。  
  再向层析柱加入10倍柱体积, 20% Ethanol，于4~8 ℃冰箱保存。

表1 Immunoglobulin Reactivity with Protein A & Protein G

IgG类型	Protein A	Protein G	IgG类型	Protein A	Protein G
人 IgG1	++++	++++	大鼠 IgG2b	-	++
人 IgG2	++++	++++	大鼠 IgG2c	+	++
人IgG3	-	++++	大鼠 IgM	+/-	-
人IgG4	++++	++++	兔 Ig	++++	+++
人IgA	++	-	鸡 Ig	-	+
人n IgD	++	-	仓鼠 Ig	+	++
人IgE	++	-	豚鼠 Ig	++++	++
人 IgM	++	-	牛 Ig	++	++++
小鼠 IgG1	+	++++	马	++	++++
小鼠 IgG2a	++++	++++	奶牛	++	++++
小鼠 IgG2b	+++	+++	猪	+++	+++
小鼠 IgG3	++	+++	绵羊	+/-	++
小鼠 IgM	+/-	-	山羊	-	++
大鼠 IgG1	-	+
大鼠 IgG2a	-	++++